### 背景介绍

裸露的RNA是一种带负电荷的亲水性大分子，由于细胞膜的静电排斥，RNA难以穿透细胞膜，且易受RNA酶的迅速降解。因此，为了保护RNA并使其顺利进入细胞，必须有适当的保护外壳。细胞膜的主要成分为脂质，因此通过脂质囊泡封装RNA，使其能够穿过细胞膜并释放到细胞质中是可行的。这些囊泡必须是带正电荷的脂质，以便与带负电的RNA结合。值得注意的是，由于永jiu性阳离子脂质与带负电的细胞膜之间的静电相互作用，可能导致细胞毒性。因此，脂质的结构需对内体的酸性环境作出响应，以确保分子能带正电。

### 脂质纳米粒结构

脂质纳米粒（LNP）通常由四种关键成分组成：可离子化的阳离子脂质、磷脂（两性离子脂质）、胆固醇和聚乙二醇（PEG）化脂质。LNP在mRNA传递系统中起着至关重要的作用，确保mRNA能够安全有效地被输送到目标细胞并表达蛋白质。

在LNP中，可电离的阳离子脂质具有重要功能。它在自组装成LNP的过程中，能有效地载入带负电荷的RNA，并在中性pH下不带电以减少毒性。在细胞吸收后，随着内体pH的降低，这些阳离子脂质又会带上正电以促进内体的逃逸。此外，胆固醇和PEG脂质的变体可以调节LNP的物理特性、纳米结构及最终的功效。两性离子磷脂通常被称为“辅助脂质”，它们在保护mRNA、增强细胞内传递以及激活免疫反应过程中发挥了关键作用。

### LNP转染实验步骤

以下是为6孔板单孔参考条件设定的转染实验步骤。其他培养形式请参考表1。

1. **mRNA预混液制备**：将25μg mRNA（浓度为1μg/μL）与60μL Buffer混合。
2. **mRNA-easyLNP复合物制备**：将625μL mRNA预混液与625μL easyLNP纳米混悬液混合，涡旋2-3秒以确保均匀。
3. **加入细胞**：将125μL mRNA-easyLNP复合物加入细胞，轻轻晃动以使其均匀分散。
4. **分析时间**：在培养24-48小时后进行分析。

### 产品推荐

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