### 四环素类检测试剂盒使用说明书（酶联免疫法）

#### 1. 原理及用途

本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，能够有效检测组织、蜂蜜、鸡蛋等样本中的四环素类药物（Tetracyclines，TCs）。试剂盒包含预包被偶联抗原的酶标板、辣根酶标记物、抗体、标准品及相关配套试剂。在检测过程中，样品中的四环素类药物与酶标板上预包被的偶联抗原竞争抗四环素类药物抗体，随后加入酶标记物，利用TMB底物显色。样本的吸光度值与其所含四环素类药物的含量呈负相关，通过与标准曲线比较可以得出样本中四环素类药物的残留量。

#### 2. 技术指标

2.1 **试剂盒灵敏度**: 0.05 ppb (ng/ml)
2.2 **反应模式**: 37℃，30分钟～30分钟～15分钟
2.3 **检测下限**:
- 组织、肝脏、鸡蛋: 2 ppb
- 蜂蜜: 2 ppb
- 尿样: 0.5 ppb
- 牛奶: 2 ppb
- 奶粉: 4 ppb
2.4 **交叉反应率**:
- 四环素: 100%
- 强力霉素: 70%
- 金霉素: 10%
- 土霉素: 10%
2.5 **样本回收率**:
- 组织: 85±20%
- 肝脏、鸡蛋: 75±20%
- 蜂蜜: 85±20%
- 尿样: 80±20%
- 牛奶、奶粉: 75±20%

#### 3. 试剂盒组成

本试剂盒包含以下组件:
- 酶标板: 96孔高浓度标准品溶液1瓶（1ml/瓶）100 ppb（高标准液有挥发性，需注意密封）
- 标准品溶液: 0 ppb、0.05 ppb、0.1 ppb、0.2 ppb、0.4 ppb、0.8 ppb（均为空瓶，现配现用）
- 酶标记物（红盖）: 11 ml
- 抗体工作液（蓝盖）: 55 ml
- 底物液A（白盖）: 6 ml
- 底物液B（黑盖）: 6 ml
- 终止液（黄盖）: 6 ml
- 20×浓缩洗涤液（白盖）: 40 ml
- 5×复溶液（黄盖）: 50 ml
- 说明书: 1份
- 盖板膜: 1张
- 自封袋: 1个

#### 4. 所需器材和试剂

4.1 **仪器**: 酶标仪、打印机、均质器、氮气吹干装置、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量0.001g）
4.2 **微量移液器**: 单道20µl-200µl，100µl-1000µl，多道300µl
4.3 **试剂**: 浓盐酸、无水甲醇

#### 5. 样本前处理

5.1 **样本处理前须知**: 实验器具必须洁净并使用一次性吸头，以避免污染干扰实验结果。
5.2 **配液**: - 配液1: 复溶液将5×复溶液用去离子水稀释（1份5×复溶液加4份去离子水），用于样本的复溶，复溶液在4℃环境可保存一个月。
- 配液2: 工作洗涤液将浓缩洗涤液20倍稀释（1份洗涤液加19份去离子水）。
- 配液3: 样本提取液取43 ml浓盐酸加去离子水混匀，定容至50 ml，再加入450 ml无水甲醇。

5.3 **样本前处理步骤**: - 组织、肝脏、鸡蛋样本处理方法
1）准确称取1±0.005 g均质后的样本于离心管中，加入2 ml样本提取液（配液3），剧烈振荡2分钟。
2）取出50 µl上层液体，加入950 µl复溶液混匀。
3）取50 µl用于分析。样本稀释倍数：40，检测下限：2 ppb
- 蜂蜜样本处理方法
1）准确称取1±0.005 g蜂蜜样本于离心管中，加入1 ml样本提取液（配液3），振荡混匀2分钟。
2）取出50 µl混合液，加入950 µl复溶液混匀。
3）取50 µl用于分析。样本稀释倍数：40，检测下限：2 ppb。

7. **结果分析**

71 **百分吸光率的计算**: 标准液或样本的百分吸光率等于标准液或样本的百分吸光度值的平均值（双孔）除以第一个标准液（0 ppb）的吸光度值，再乘以100%。
72 **标准曲线的绘制与计算**: 以标准液百分吸光率为纵坐标，对应的标准液浓度（ppb）的对数为横坐标，绘制标准液的半对数曲线图。利用专业分析软件对结果进行快速计算和分析，可以提高工作效率，尤其适合大量样本的分析。

#### 注意事项

81 在室温低于25℃或试剂及样本没有回到室温（25℃）时，将导致所有标准的OD值偏低。
82 在洗板过程中出现孔内液体干燥的情况，会造成标准曲线不成线性。
83 所有孵育过程应用盖板膜封住微孔板，避免光线照射。
84 不要使用过期的试剂盒，避免不同批次试剂混用。
85 对于显色液若出现变质迹象应立即弃之。

在生物医疗领域，选择使用尊龙凯时的四环素类检测试剂盒，您将享受到更高的精准度及可靠性，确保检测结果的有效性和实验的顺利进行。