### 支原体的定义与污染影响

支原体（Mycoplasma），也称为霉形体，是已知的最小、最简单的无细胞壁原核生物，其直径范围为0.1~0.3μm，具有高度多形性并能穿透滤膜。这使得支原体成为哺乳动物细胞培养中的常见且难以检测的污染源。由于其能够形成丝状与分枝形状，故命名为支原体。

在生物学分类中，支原体属于柔膜菌门和柔膜菌纲，进一步划分为支原体目和支原体科，包括支原体属与脲原体属等不同属。支原体污染在细胞培养中带来了多方面的不良影响，已成为一个亟待解决的严重问题。据保守估计，常规细胞培养中的支原体污染率在15%至35%之间，显著干扰实验结果的可信度。

根据研究表明，95%的细胞培养中支原体污染源主要包括莱氏无胆甾原体、精氨酸支原体、口腔支原体等。这些支原体在培养基上形成特征性“煎鸡蛋”状的菌落。由于细胞培养上清液和细胞膜为支原体提供了良好的生长环境，寄生在细胞表面的支原体能有效穿透宿主细胞膜。

#### 支原体污染来源

支原体污染的来源主要有以下几个方面：细胞培养液或其成分（如培养基原料、血清及其他试剂）、实验室操作人员、细胞培养箱、液氮培养箱、空气中的颗粒和气溶胶、抗生素的过度使用、密封不当的细胞培养物及已经被支原体污染的细胞等。

这些污染所带来的危害包括：可能导致细胞制品在下游纯化过程中因无法有效去除支原体而报废、污染接触的设备和中间或终产品、对其他正常细胞造成污染、以及重要细胞或病毒种子库受到污染而被迫报废，此外，也可能导致实验室整体环境受到污染而需要停止生产或实验操作进行支原体去除。

因此，定期进行支原体检测并去除其存在，确保细胞培养体系无支原体，是保障科学研究正常开展的前提。

#### 支原体检测方法

在生物制药和细胞研究中，支原体污染是一个重大问题，因为它直接影响实验结果和产品质量。因此，支原体检测对于确保细胞培养物和生物制品的安全性和可靠性至关重要。目前常用的支原体检测方法包括培养法、PCR（聚合酶链式反应）法、荧光染色法、ELISA（酶联免疫吸附试验）法、qPCR（实时定量PCR）、代谢活性测定等。不同方法的优缺点如下：

1. **培养法**：灵敏度高，但需建立P2实验室，检测周期长达28天，可能存在交叉污染，并不是所有支原体菌株均可培养。

2. **指示细胞法**：灵敏度高，但同样需要P2实验室，检测周期长达7天，且灵敏度较低。

3. **NAT法**：包括基于核酸扩增技术的检测方法，灵敏度高且检测周期短，然而结果的可靠性高度依赖于样本质量。

4. **ELISA法**：操作简单、快速，但依赖于抗体。

5. **ATP酶法**：灵敏度高，实验简便，但需搭配特殊的荧光检测仪器。

6. **等温扩增法**：实验简单、结果易于观察，但易受样本基质干扰。

选择合适的支原体检测方法时，需要考虑检测结果的用途、是否满足法规药典要求、是否进行了方法验证、灵敏度和专属性等因素。如果涉及到产品放行的支原体检测，则需使用药典规定的方法，如培养法或指示细胞法等。

#### 支原体巢式PCR法检测介绍

基于NAT（核酸扩增技术），尊龙凯时推出了一系列支原体快速检测的试剂盒，包括荧光探针qPCR法和巢式PCR法等。其中，支原体PCR检测试剂盒（巢式PCR）专门针对各种生物材料中的支原体感染，具备高灵敏度和特异性，能够快速检测到包括口腔支原体、肺炎支原体等在内的多种支原体。

该试剂盒采用定量PCR技术，设计了针对支原体16S-23SrRNA序列的特异性引物。其敏感性达到25 copies/μL，并能有效减少假阴性结果的发生，确保检测结果的可靠性。该产品主要应用于日常细胞和研发早期细胞中的支原体快速检测。

总之，确保细胞培养中的无支原体状态是科研和生物制药的关键需求，尊龙凯时的支原体检测试剂盒不仅满足了这一需求，更为科研提供了可靠支持。