细胞株是由单个细胞分离培养或筛选后增殖形成的细胞群体，具有特定的性质和标志，这些特性必须在整个培养过程中维持。然而，在体外培养细胞株时，常会遇到一系列问题，例如细胞无法贴壁生长、生长缓慢或细胞死亡。以下是一些预防和解决这些问题的措施：

一、细胞株无法在培养器皿上贴壁生长

1. **胰酶消化过度**：减少胰酶的消化时间或用量。
2. **支原体污染**：隔离细胞株并检测是否受到支原体感染；定期清洗通风厨和培养箱。如发现污染，需进行灭菌处理并弃置受污染的细胞。
3. **培养基中缺乏附着因子**：使用无血清培养基时，确保添加附着因子或使用已包被的培养板。

二、细胞株生长缓慢

1. **培养基或血清变化**：比较不同培养基配方中的成分，如葡萄糖和氨基酸；通过生长实验比较新老批次血清的差异；适当增加细胞株的初始接种密度，以便其逐步适应新的培养基。
2. **生长促进成分耗竭**：更换老化培养基，加入新鲜的培养基并添加必需的生长促进成分。
3. **轻微的细菌或真菌污染**：在不添加抗生素的条件下培养；若细胞受到污染，需进行灭菌处理并丢弃。
4. **储存条件不当**：血清需在-5℃至-20℃下储存，培养基则应在2℃~8℃避光条件下保存，尽量缩短其暴露在光线下的时间。
5. **初始接种密度过低**：适当提高活细胞的接种密度。
6. **细胞衰老**：淘汰老化的细胞，使用代数较少的细胞进行培养。
7. **支原体污染**：同上，进行适当的隔离和检测。

三、培养基pH值变化迅速

1. **CO2分压设置错误**：根据培养基中NaHCO3的浓度调整培养箱的CO2分压，一般在NaHCO3浓度为20-37g/L时，CO2分压应调至5%-10%。
2. **培养瓶瓶盖过紧**：将瓶盖轻松旋松约1/4圈。
3. **缓冲系统不足**：添加HEPES缓冲液，使终浓度达到10-25mM。
4. **盐含量不当**：在CO2平衡环境中使用以Earle平衡盐为基础的培养基，而在大气条件下使用Hanks平衡盐基础的培养基。

四、细胞株凋亡

1. **培养箱中缺少CO2**：需定期监测培养箱中CO2的使用情况，及时替换气瓶，并检查管路连接处是否有漏气；避免频繁开关培养箱门。
2. **培养箱温度波动**：监测并及时校正培养箱内的温度。
3. **抗生素浓度过高**：适量减少抗生素用量；使用无血清培养基时，抗生素浓度应降至1/10。
4. **细胞复苏或冻存受损**：应使用新鲜的细胞进行实验。
5. **培养基渗透压不适当**：检查培养基的渗透压，大部分哺乳动物细胞耐受260~350mOsm/kg的渗透压，昆虫细胞的培养基渗透压需要更高（340~380mOsm/kg）。
6. **毒性代谢产物积累**：更换原培养基，使用新鲜培养基。

五、悬浮细胞株聚集

1. **存在钙离子和镁离子**：使用不含这两种离子的平衡盐溶液清洗细胞，并轻轻吹打，形成单细胞悬液。
2. **支原体污染**：同上，进行适当处理。
3. **蛋白水解酶消化过度导致细胞裂解**：使用0.001% DNA酶I处理细胞，并用PBS冲洗后接种到新培养基中。

希望以上方法能够帮助您在细胞株培养过程中解决各种问题，确保实验顺利进行。尊龙凯时将为生物医疗领域的研究提供全方位的支持与服务，让每一个细胞株的培养过程更加高效、可靠。